РНК вируса гепатита С

Представление об этиологии, патогенезе, клинической картине, которую провоцирует вирус гепатита С, формировалось на протяжении многих лет. Досконально изучить сам возбудитель патологии, выделить его РНК и разработать технику скрининга удалось только после 1992 года с появлением новых иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследования.

Вирус гепатита С и его лечение

На сегодняшний день известны 9 ДНК- и РНК-содержащих вирусов, способных вызвать гепатит. В основу их клинической классификации положены различия в путях передачи. Фекально-оральный механизм заражения характерен для А и Е разновидностей заболевания. Hepatitis C Virus (вирус HCV) передается преимущественно через кровь.

По данным ВОЗ, гепатит С является одной из самых распространенных парентеральных инфекций.

До начала 1990-х годов основным способом заражения было переливание крови и/или пересадка донорских органов. Однако с появлением эффективных методик скрининга зарегистрированы единицы случаев инфицирования таким путем. Передача возбудителя возможно только при трансфузионных процедурах, проведенных с использованием не проверенного должным образом биологического материала.

В настоящее время инфицирование возможно при:

  • посещении стоматолога, косметолога, медицинской лаборатории (вирус гепатита C попадает в кровь здорового человека с недостаточно и/или неправильно продезинфицированных инструментов);
  • проведении эндоскопии и других инвазивных процедур;
  • выполнении гемодиализа;
  • частых медицинских манипуляциях (например, при длительном пребывании в больнице, необходимостью постоянного внутривенного или внутримышечного введения лекарственных препаратов, выполнение различных диагностических процедур);
  • наличии ВИЧ (неадекватный иммунный ответ приводит к значительному повышению риска инфицирования при малейшем контакте с возбудителем);
  • использовании одного шприца несколькими людьми для внутривенного введения наркотических средств;
  • незащищенном половом контакте с носителем HCV;
  • использовании общих с больным человеком предметов обихода (при условии наличия высохшей крови, реже – других биологических жидкостей, в которых вирус может долгое время сохранять жизнеспособность).

Инфекционный гепатит С называют «ласковым убийцей». Это связано с длительным бессимптомным течением болезни. Даже в острой фазе патологии клиническая картина проявляется не более чем у 15–30% пациентов. Признаки болезни изменчивы, нередко больные испытывают только слабость и общее недомогание. Поэтому в 80% случаев инфекция практически незаметно ни для самого человека, ни для врача (без проведения лабораторных тестов) переходит в хроническую фазу.

В такой форме заболевание протекает годами, в то время как в тканях печени происходят изменения, не поддающиеся ни лечению, ни восстановлению хирургическим путем, за исключением трансплантации. Первым этапом осложнений считают фиброз: замещение участков некроза гепатоцитов соединительнотканными структурами. Затем почти у половины пациентов развивается цирроз, сопровождающийся яркими нарушениями функциональной активности печени. У 7% больных конечным этапом HCV служит гепатоцеллюлярная карцинома, злокачественное новообразование, которое крайне сложно поддается терапии, особенно на фоне прогрессирующей вирусной инфекции.

Изучение, как выглядит вирус под микроскопом, детальная информация о структуре генома HCV позволяют проводить точную диагностику на ранних этапах патологии. Исследование процессов репликации (от английского слова «replication», которое переводится как копирование, дублирование, воспроизведение) обусловило прорыв в терапии гепатита С. Созданные по результатам долговременных клинических исследований лекарственные препараты обеспечивают практически 100% излечение.

История открытия HCV и эпидемиология

Уже в начале 1980-х специалисты пришли к выводу, что некоторые случаи заболевания не связаны с уже известными на тот момент вирусами разновидности А и В. В конце 1980-х «новым» типом вирусного гепатита были заражены шимпанзе. Образцы крови животных тщательно проанализировали и изучили под микроскопом.

Модель вируса гепатита С

Таким образом выявлен геном HCV, который долгое время именовали разновидностью «ни А, ни В». Но в начале 90-х во Всемирной организации здравоохранения пересмотрели систематику инфекционных болезней. Патология приобрела название «гепатит С».

Практически сразу разработаны методики скрининга вируса, особенно важным были тесты, способные определять наличие РНК HCV в донорском биологическом материале. Таким образом удалось существенно снизить уровень заболеваемости в ходе трансфузионных процедур.

Но на сегодняшний день точных данных относительно эпидемиологии гепатита С нет. Имеется лишь информация из официальных статистических источников, в соответствии с которой HCV диагностирован почти у 200 млн. человек. Ежегодный прирост числа инфицированных составляет от 3 до 5 млн. человек. Однако при этом учитываются только известные случаи гепатита С, предполагают, что с учетом бессимптомного носительства, широкого распространения заболевания среди асоциальных категорий населения, реальные цифры гораздо выше официальных.

По мнению специалистов, долгое время занимающихся молекулярным изучением HCV, история болезни начинается на Африканском континенте. Передача вируса происходила в процессе проведения различных религиозных ритуалов, связанных с обменом кровью. Позже, при развитии мореплавания, HCV появился на Европейском и Американском континентах.

В настоящее время вирусный гепатит С встречается повсеместно. Однако отмечают четкую связь распространенности генотипа патологии и региона. В России и странах бывшего СНГ преимущественно диагностируют 1 и 3 разновидности, 1 и 2 – на территории Северной Америки, 4 и 5 – в Африке, 2 и 6 – в странах Азии. Но миграция населения создает условия для повсеместного распространения генотипов и их мутации.

Показатели заболеваемости HCV-инфекцией напрямую зависят от уровня среднего дохода населения. Чем ниже количество людей, употребляющих наркотики, чем лучше качество и доступность медицинской помощи, тем реже диагностируются случаи вирусного гепатита С. Инфекция поддается терапии, в отличие от вызываемых HCV осложнений. Поэтому доктора рекомендуют регулярно выполнять соответствующие исследования для своевременной диагностики заболевания.

Строение РНК вируса гепатита С

Основу генома вирусного гепатита С составляет 5’нетранслируемый участок с кодом для протеина-предшественника из 3000 аминокислот и 3’некодируемого региона.

После протеолитического расщепления протеина-предшественника клеточными и вирусными протеазами образуются 3 структурообразущие белковые структуры:

  • ядерный С-core протеин;
  • протеины оболочки Е1 и Е2;
  • неструктурные белки NS2–NS5B.

Репликация вируса происходит при изменении полярности (транскрипции) РНК-нити генома с положительную на отрицательную. Как и другие РНК-содержащие вирусы, HCV склонен к мутациям, происходящим на уровне Е1 и Е2. Специалисты предполагают, что таким образом подавляется выработка антител (АТ), и это сопровождается хроническим течением патологии и постоянной репликации HCV в клетках печени.

Специалисты дают точное объяснение, что значит РНК вируса гепатита С. HCV относится к семейству Flaviviridae, роду Hepacivirus. Сама патогенная частица представляет собой сферу размером порядка 50 нм. Включает однонитевую линейную молекулу рибонуклеиновой кислоты (РНК), протяженность которой составляет более 9500 нуклеотидных остатков.

РНК заключена в нуклеокапсид с включенными в его структуру белками, кодированными РНК вируса гепатита С. В геноме HCV выделяют две области: структурную и неструктурную. Гены, кодирующие структурные протеины, располагаются у области 5’, неструктурные – у 3’. Ген гепатита С имеет одну открытую рамку считывания, которая позволяет продуцировать полипептид, состоящий из 3000 аминокислот. Впоследствии под влиянием клеточных и вирусных протеаз данное соединение «нарезается» на структурные и неструктурные белки.

Кратко строение и жизненный цикл вируса представлены на схеме:

Жизненный цикл вируса (схема)

Структурные белки возбудителя гепатита С представлены:

  • core-Ag;
  • Е1;
  • Е2.

Первый используется и для построения нуклеокапсида, и для репликации. Е1 и Е2 располагаются на наружной оболочке вирусной частицы. На их поверхности есть антигенные детерминаты. Е2 и Е2 выполняют несколько функций. Это проникновение вируса внутрь клетки печени, формирование реакции иммунной системы и одновременно «маскировка» HCV от специфических иммунных структур.

Доктора сравнили образцы крови одного и того же пациента с гепатитом С, взятые в разные периоды заболевания. В процессе исследования обнаружен гипервариабельный регион в участке гена Е2. Именно его изменчивостью и объясняют ускользание вируса от иммунной системы человека и переход заболевания в хроническое течение.

В неструктурной зоне РНК HCV выделяют:

  • NS2;
  • NS3;
  • NS4A и B;
  • NS5A и B.

Большинство из этих белков необходимы для репликации вируса. Вырабатываемые на неструктурные протеины АТ не обладают протективными качествами.

Определение РНК вируса гепатита С – цель одного из основных диагностических тестов – полимеразной цепной реакции (ПЦР). А продуцируемые на структурные и неструктурные протеины антитела выявляют иммуноферментным анализом (ИФА). Если при проведении двух исследований HCV не обнаружен, повторное определение вируса либо не делается, либо выполняется через 4–6 недель.

Устойчивость возбудителя

Такой вопрос, как устойчивость вируса гепатита С во внешней среде, часто беспокоит родственников и членов семьи инфицированного человека. При комнатной температуре (стандартной влажности и прочих условиях) HCV остается заразным до 4 суток в высохшей крови (при высокой вирусологической нагрузке у больного достаточно нескольких капель).

Особенно в плане инфицирования (при условии совместного использования с зараженным человеком) опасны:

  • полотенца;
  • бритвы;
  • зубные щетки;
  • медицинские и косметологические инструменты;
  • ножи (после случайных порезов в процессе приготовления блюд);
  • постельное и нательное белье.

При кипячении (температурный режим 95–100°С) инактивация вируса происходит за 5–10 минут. Для уничтожения патогена при 60°С требуется не менее 20 минут. Поэтому для дезинфекции белья достаточно постирать его в автоматической машине в полноценном режиме, а затем с двух сторон прогладить утюгом.

Для обработки поверхностей и предметов обихода пользуются стандартными дезинфицирующими растворами. На вопрос, погибает ли от спирта возбудитель гепатита С, доктора дают положительный ответ. Кроме того, жизнедеятельность HCV останавливается под влиянием раствора хлорки и других средств, применяемых для обеззараживания и дезинфекции.

Распространенность гепатита С

В донорской крови HCV остается заразным на протяжении длительного времени, в том числе и под влиянием низких температур: для сохранности биологический материал замораживают. Поэтому, начиная с 1992 года, кровь проверяют дважды: непосредственно после забора и спустя полгода. Таким образом практически полностью исключается риск инфицирования здорового человека при трансфузионных процедурах.

Где содержится HCV кроме крови? Вирус разносится по всему организму. Однако концентрации в слюне, сперме, менструальных выделениях незначительны. Исключение составляют пациенты с высокой вирусологической нагрузкой.

Поэтому для предупреждения заражения необходимо соответствующим образом обрабатывать предметы личной гигиены, постель, нательное белье инфицированного человека. После постановки диагноза, врач подробно объясняет пациенту, убивает ли спирт вирус, перечисляет меры профилактики заражения других людей.

Способы заражения

Основной путь инфицирования HCV – парентеральный. Здоровый человек может заразиться при любом контакте с контаминированной кровью: при медицинских манипуляциях, случайном порезе при проведении косметологических процедур и т.д. Также возможна передача инфекции при использовании общих с зараженным человеком предметов гигиены, на которых сохранились капли крови (слюны и спермы – в крайне редких случаях).

Существует 15–20% вероятность инфицирования при половом контакте, особенно, если партнеры отдают предпочтение нетрадиционному сексу и не пользуются презервативами. В настоящее время установлено, что HCV не способен пройти через плацентарный барьер, поэтому заражение ребенка происходит через кровь больной матери при прохождении по родовым путям.

Что происходит в организме после инфицирования

С момента обнаружения HCV, строение вируса, его жизнедеятельность и патогенез гепатита С изучались в образцах крови как инфицированных людей, так и шимпанзе. После заражения патоген выделяют не только в гепатоцитах, но и в гемопоэтических клетках.

Специалисты не могут с уверенностью сказать, осуществляется ли репликация вируса вне печени. Однако случаи повторного возникновения заболевания после тотальной трансплантации печени указывают на такую возможность. О внепеченочном развитии патологии свидетельствуют криоглобулинемия, поздняя кожная порфирия, гломерулонефрит и ряд других болезней.

Отдельные звенья развития вируса и иммунного ответа человека изучены не до конца. Вскоре после заражения в крови обнаруживаются антитела против структурных и неструктурных протеинов HCV: core, Е1, Е2, NS3–NS4. Данный физиологический защитный механизм лежит в основе одного из методов диагностики гепатита С.

Перенесенный HCV не приводит к формированию защитного иммунитета. После лечения возможно или реинфицирование, или заражение другим генотипом.

Опасны осложнения вирусной инфекции. Установлено, что репликация HCV приводит к некрозу клеток печени, а отмершие участки замещаются соединительной тканью. Впоследствии фиброз сменяется циррозом. У 5–6 человек из 100 с подтвержденным диагнозом гепатита С приблизительно через 20–25 лет (иногда раньше, т. к. многое зависит от генотипа) выявляют злокачественное новообразование в печени.

Как диагностировать наличие возбудителя в крови

Чтобы подтвердить наличие инфекции в организме, доктора назначают специфические исследования, которые проводятся в несколько этапов.

Принципы диагностического процесса приведены на схеме:

Схема диагностики гепатита С

В соответствии с общепринятым протоколом, диагностировать гепатит С начинают с серологического иммуноферментного анализа (ИФА). Данное исследование заключается в выявлении специфических иммуноглобулинов (IgG и IgM), которые являются реакцией организма на определенные протеины HCV.

Однако результаты ИФА нельзя считать 100% гарантией наличия или отсутствия гепатита С. Для подтверждения инфицирования (или же при сомнительных данных) в обязательном порядке проводят качественный анализ методом полимеразной цепной реакции. Исследование позволяет установить, есть ли в крови РНК возбудителя заболевания.

Если HCV не обнаружен, дальнейшее обследование пациента прекращают. Но если риск заражения высок (например, при контакте с кровью, половой акт с инфицированным, рождение ребенка от больной матери и т.д.) перечисленные исследования выполняют заново через несколько недель. При положительном результате качественной ПЦР необходим количественный анализ для определения РНК вируса, выяснение генотипа и ряд других тестов.

Аналитическая чувствительность РНК HCV современных тест-систем ПЦР позволяет выявить возбудителя через 1,5–2 недели после заражения.

Генотипирование вируса гепатита С

Генотипирование вируса гепатита С – обязательная часть обследования больного. Анализ проводится до начала курса лечения. В России и странах СНГ чаще всего выявляют 1 или 3 генотип HCV. Разновидность вируса – один из основных показателей, определяющих ход терапии и риск развития осложнений.

Первый генотип отличается склонностью к бессимптомному течению и быстрой хронизации патологического процесса. Третий характеризуется высоким риском серьезных осложнений. Гепатоцеллюлярная карцинома чаще встречается у пациентов именно с данной разновидностью HCV.

Но в некоторых случаях генотипирование непоказательно. Если не определился генотип вирусной инфекции, это означает, что РНК вируса либо отсутствует, либо его недостаточно для определения разновидности HCV.

Эффективные методы борьбы с вирусом

Возбудитель HCV – это вирус или бактерия? Специалисты дают однозначный ответ на этот вопрос. Гепатит С – поражение печени исключительно вирусной природы, требующее длительной терапии. При этом лечение подбирают после проведения всех диагностических тестов. Только квалифицированный специалист может объяснить пациенту, как убить вирус гепатита С. Самостоятельный прием каких-либо препаратов противопоказан.

Профилактические меры

Для предотвращения инфицирования необходимо избегать возможного контакта с кровью больного человека. С этой целью рекомендуют:

  • тщательно подходить к выбору стоматологической клиники;
  • по возможности следить, чтобы медицинские манипуляции проводились стерильными и/или одноразовыми инструментами;
  • делать маникюр и педикюр с использованием стерильного инструментария;
  • при половых контактах пользоваться презервативами;
  • не применять бывшие в использовании шприцы, иголки и т.д.

Особенно важно соблюдать меры профилактики при постоянном проживании с больным человеком.

Правила дезинфекции и стерилизации

Для обработки поверхностей подходят стандартные дезинфицирующие растворы. Можно приобрести специальные средства в аптеке либо пользоваться хлоркой. Стирку одежды, белья, полотенец выполняют при максимально допустимой для ткани температуре с последующей обязательной глажкой. Необходимо регулярно кипятить предметы личной гигиены инфицированного.

Если произошло заражение

Современные рекомендации ВОЗ подробно описывают, как лечить вирус гепатита С. Существующие на сегодняшний день медикаменты могут полностью вывести из организма инфекцию за несколько недель. В большинстве случаев при использовании комбинации из двух и более противовирусных средств положительный результат лабораторно подтверждается через 4 недели.

Для эффективного лечения назначают Софосбувир, Ледипасвир, Даклатасвир и другие средства. Иногда при реинфекции, резистентности, отсутствии результата от предшествующей терапии дополнительно прописывают Рибавирин либо Интерферон. Курс лечения в среднем продолжается 12 или 24 недели. Отрицательный результат качественной ПЦР на 48 неделе после окончания терапии характеризует полное выздоровление.

Источник: https://med88.ru/gepatit-s/virus/

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РНК ВИРУСА ГЕПАТИТА С

Вирус гепатита С попадает в организм преимущественно через кровь, причем для заражения порой достаточно одного контакта. Болезнь развивается постепенно. И когда тревожные симптомы еще невозможно заметить, вирус уже может активно размножаться, поражая ткани печени. Количественный анализ на гепатит С помогает определить, насколько сильно поражен организм, имеется ли в наличии заболевание и на какой стадии пребывает.

СПОСОБЫ ДИАГНОСТИРОВАНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЯ

Определение такой страшной болезни — задача не из легких хотя бы потому, что на ранних стадиях гепатит никак себя не проявляет. Чаще всего для диагностирования врачи обращаются к следующим методикам:

  • внешний осмотр и опрос пациента;
  • ПЦР-анализ крови на наличие или отсутствие молекулы РНК гепатита;РНК вируса гепатита С
  • биохимический и общий анализ крови;
  • анализ на маркеры заболевания;
  • УЗИ брюшной полости, с помощью которого удается заметить изменения в состоянии внутренних органов;
  • биопсия печени с забором ткани с помощью специальных методик.

На поздних стадиях развития недуга заметить признаки вирусного заболевания несложно, ведь кожные покровы обретают желтушный цвет, человека постоянно беспокоит боль в области правого подреберья, может возникнуть асцит. Однако на этой стадии излечение уже невозможно: болезнь давно перешла в хроническую стадию, а значит, она вот-вот обернется циррозом или язвой.

Определять болезнь нужно как можно раньше, но тут возникают проблемы. Вирус не сразу начинает оказывать негативное влияние на печень, и еще несколько месяцев орган может работать бесперебойно. На этой стадии биохимический анализ может не показать существенных изменений, и даже биопсия порой не дает результатов.

Спасением для пациента становится анализ ПЦР на гепатит, с помощью которого удается определить количественные показатели, сделав выводы о наличии или отсутствии заболевания. Главное достоинство этого анализа состоит в том, что он очень точен и может показать наличие или отсутствие вируса уже через 10–14 дней после заражения. На этой стадии велик шанс приостановить развитие болезни, не допустив ее прогресса в хроническую стадию.

КАЧЕСТВЕННЫЙ И КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Расшифровать анализы под силу только опытному врачу. Часто на ранних стадиях вирус практически незаметен, и поэтому врачи, проведя ПЦР, его просто не замечают. Однако, чем раньше болезнь будет определена, тем позитивнее в итоге окажется прогноз.

Для постановки диагноза используется качественный анализ. Врач берет кровь на исследование и пытается обнаружить РНК вируса. Нормальные анализы его лишены, но если он был обнаружен, то специалисту нужно определить тип болезни. РНК вируса гепатита СЗаражение гепатитом А, В и С происходит разным образом, да и методики лечения заметно отличаются.

Количественный анализ проводится лишь в том случае, если качественный оказался положительным. В каких случаях нельзя обойтись без проведения такой процедуры:

  • Для определения наличия вируса и постановки итогового диагноза.
  • Для определения стадии развития недуга.
  • Врачи используют методику для определения перехода заболевания в хроническую стадию.
  • Необходима она и для мониторинга эффективности противовирусного лечения.

Расшифровывать анализ должен исключительно специалист, и тут важно опираться на точность исследования. В идеале РНК вирус должен отсутствовать. Если же в крови он имеется, то приходится вычислять, насколько сильно он распространен.

Сдавать биологический материал для такого анализа придется неоднократно, поскольку специалист должен отслеживать эффективность лечения. При его высокой результативности концентрация РНК-вируса в крови неизменно снижается.

При гепатите С количественный показатель вычисляется в случае острой стадии хронической болезни. Врачи делают примерные прогнозы продолжительности жизни.

Иногда обнаружить вирус в крови не удается, потому что имеет место ложноотрицательный результат. Бывает и противоположный — ложноположительный. Количественное исследование должно проводиться несколько раз, чтобы наверняка выявить коварную болезнь.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ: НОРМА И ПРЕВЫШЕНИЕ

Показатели РНК вируса гепатита С при количественном исследовании в норме демонстрируют полное отсутствие вируса. Если же врач замечает хотя бы минимальное его содержание в крови, речь идет о заражении. Варианты:РНК вируса гепатита С

  1. В норме полимеразная цепная реакция не должна превышать 400 МЕ/мл. Такой показатель означает, что концентрация вируса очень мала и человек вряд ли может заразить окружающих. Однако болезнь есть, поэтому необходимо проводить срочную терапию.
  2. Если этот показатель выше 800 МЕ/мл, то речь идет о прогрессе болезни, хронической стадии ее развития. В таких случаях необходимо проводить максимально интенсивную лекарственную терапию, а иначе болезнь способна довести человека до летального исхода.
  3. Если этот показатель превышает 1 млн/мл, то речь идет о критическом развитии гепатита С. Вероятность летального исхода в ближайший месяц составляет 80%.

Количественный анализ на гепатит С расшифровку имеет разную, все зависит от стадии заболевания, пола и возраста пациента. Например, у мужчин концентрация вируса может быть выше 400 МЕ/мл, но болезнь будет все еще пребывать на ранних стадиях развития.

Врачи предпочитают проводить такие исследование на 1, 4, 23 и 12 неделях лечения. Это необходимо для того, чтобы проследить эффективность применяемых методик. Например, если на первой неделе показатель был 800 МЕ/мл, а к 12-й он стал 300 МЕ/мл, значит, лечение оказалось эффективным и заболевание начало отступать.

Врачи отмечают, что в 25% случаев удается если не победить болезнь, то хотя бы отсрочить следующий рецидив.

Помимо методики ПЦР-исследования крови, которая считается довольно дорогостоящей, используются и иные:

  • Применяется метод Р-ДНК, который стоит недорого, но имеет низкую чувствительность. Тут наличие вируса определяется лишь при его концентрации выше 500 МЕ/мл.
  • Популярен и метод транскрипционной амплификации (ТМА), главное достоинство которого кроется в высокой чувствительности при минимальной стоимости. Благодаря такому методу определить вирус удается даже при концентрации от 5–10 МЕ/мл.

«Гепатит С» — серьезный диагноз, часто означающий, что пациент умрет в ближайшие 5–10 лет. Однако методика ПЦР-исследования крови помогает определить болезнь на самых ранних стадиях и с помощью медикаментозной терапии остановить ее развитие.

РНК HCV не обнаружено: что это значит?

Гепатит С – опасное вирусное заболевание, чреватое осложнениями. Из-за отсутствия специфической симптоматики, схожести с другими болезнями, выявляется только методами молекулярной диагностики. Для определения возбудителя проводится анализ ПЦР (метод полимеразной цепной реакции).

Если РНК вируса гепатита С не обнаружена, это значит, что человек здоров, либо анализ взят слишком рано. Возбудитель становится активным только через пять дней, поэтому при подозрении на инфицирование проводится повторный тест. Если биохимические показатели в норме, человек признается здоровым.

Анализ на РНК вируса гепатита С

Молекулярное исследование показывает, есть НСV в крови или нет. Когда на бланке качественного анализа указан результат «гепатита С не обнаружено», больной не опасен для окружающих. Необходимо провести повторное тестирование через две недели, чтобы удостовериться в отсутствие РНК. Если качественный результат положительный (надпись «обнаружено»), проводится количественное тестирование.

Качественный анализ

Метод генетического исследования выявляет вирус в минимальной концентрации. Параметры ограничены чувствительностью прибора. Она колеблется в диапазоне от 10 до 500 МЕ/мл. Это референсные значения, ниже которых на бланке анализа будет написано «не обнаружено».

При выборе лаборатории важно спрашивать, каким оборудованием будет производиться анализ методом полимеразной цепной реакции. Выявить HCV при низкой виремии (концентрации возбудителя в пробах) можно на приборах чувствительности до 50 МЕ/мл.

Возможные результаты:

  • «обнаружено»;
  • «не обнаружено».

Когда в крови возбудитель присутствует в небольшом количестве, болезнь будет развиваться. Если основные биохимические показатели ниже референсных значений, есть подозрение на заражение, при результате теста «не обнаружено» лучше повторить качественный анализ через какое-то время.

Возможен результат «обнаружено». Только при хорошей иммунной защите организм способен самостоятельно справиться с возбудителем. Гепатит по симптоматике схож с другими болезнями, если выявить вирус на ранних стадиях болезни, снижается риск аутоиммунных осложнений.

Количественный анализ

Недостаточно обнаружить HCV, для определения схемы приема препаратов нужно знать концентрацию вируса в крови. По результатам количественного анализа ПЦР судят о вирусной нагрузке.

Определение количества РНК (удельного содержания возбудителя в одном мл крови) помогает установить стадию развития болезни. Вирус размножается постепенно. Нельзя путать стадию развития гепатита со степенью тяжести болезни. Люди, имеющие одинаковые результаты, анализа могут чувствовать себя по-разному:

  • при слабом иммунитете гепатит маскируется под ОРВИ;
  • при сильной защите возможная острая форма болезни, когда глобулины массово атакуют НСV;
  • возможно появление типичных для печеночных патологий симптомов, характерных для заболевания средней степени тяжести.

Расшифровка количественного анализа – дело специалистов. Международная система стандартов допускает оформление результатов в двух измерениях:

  • МЕ/мл;
  • копии/мл.

Пересчет результата производится по формуле:1 МЕ/мл = 4 копии/мл. У медиков приняты следующие количественные оценки:

  • ниже 180 МЕ/мл (720* к/мл) – малоопасная концентрация;
  • до 800 000 МЕ/мл – низкая концентрация;
  • свыше 800 000 МЕ/мл – высокая вирусная нагрузка;
  • свыше 25 000 000 МЕ/мл – сверхвысокая (критическая )концентрация НСV в крови.

 Анализ на антитела (ИФА)

Обнаружение специфических белков, убивающих НСV, свидетельствует об иммунном ответе организма. ИФА определяет антитела, не только к гепатиту. Этим методом диагностируются другие виды патологий, инфекционных заболеваний.

Исследование проводится при подозрении на заражение, оно подтверждает или ставит под сомнение отрицательный результат ПЦР. Антитела – своеобразная иммунная память, они остаются у здорового человека до трех лет, реже – на протяжении всей жизни (устойчивая защита к вирусу).

Если у пациента антител нет, это говорит о невосприимчивости организма к возбудителю, он не распознается как чужеродный. Если проверяют пациента, не болевшего гепатитом, возможен результат «не обнаружено» на РНК и антитела.

Что значит, если РНК вируса не обнаружено?

Такой результат возможен, если:

  • человек здоров (возможен при проведении профосмотров, обязательном тестирование при поступлении больных на лечение в стационар);
  • концентрация НСV ничтожна, ниже порога чувствительности;
  • со времени заражения прошло менее 5 суток (вирус не выявляется сразу после попадания в кровяное русло);
  • произошла санация крови после лечения гепатита С, организм выработал мощную антивирусную защиту, подавил размножение возбудителя.

Для пациентов, у которых было инфицирование, кровь на стерильность проверяется на протяжении трех лет через каждые полгода. Если отрицательный результат подтверждается, человек признается полностью излечившимся.

Что значит, если РНК гепатита С не обнаружено, а антитела есть?

Присутствие антител говорит о хорошем иммунитете. Часть людей (до 10%) способны самостоятельно излечиваться. Организм способен подавить вирус, без препаратов. Часто НСV у таких людей нет, а ИФА-тест показывает присутствие антител.

Другой вариант подобных результатов – выздоровление пациента. Для эффективного иммунного ответа порой требуются годы. Хроническая форма с периодами ремиссий способна обостриться. Тяжело переносят гепатит С люди с острой формой заболевания, когда глобулины поражают гепатоциты, на которых остались следы пребывания возбудителя.

Наличие антител при отсутствии РНК – самый благоприятный результат комплексного обследования.

Когда нужно повторить анализы?

При ложноположительных и ложноотрицательных оценках повторные пробы назначаются сразу. Когда обнаруживают РНК и антитела одновременно, повторные тесты нужны для определения динамики развития болезни.

Традиционный курс лечения после выявления гепатита С предусматривает обязательное тестирование сначала через пару недель, затем на 4-1, 12-й, 24-й неделе. Больные не снимаются с учета до трех лет. Через каждые полгода проводится обследование.

При большой вирусной нагрузке частотность повторных проб меняется, врач корректирует тактику лечения. Подвид 1 генотипа НСV не сразу поддается лечению, подвиды 2,3 не очень устойчивы, быстро уничтожаются. Противовирусные средства принимаются разными курсами.

Что делать, если РНК обнаружена?

Пациент признается больным, если в анализах значение «РНК HCV обнаружена». Врач назначает схему лечения, диету. Вирусоноситель возлагает добровольные обязательства по соблюдению правил гигиена, снижающих риск передачи возбудителя.

Основные пути передачи – гематогенный и половой. Возможна вертикальная передача инфекции через плацентарный барьер или во время родов, планированную беременность лучше отложить до выздоровления.

Беременные одновременно посещают гинеколога и инфекциониста, чтобы снизить риск вертикальной передачи возбудителя. Препараты нового поколения без побочных действий, их назначают детям младшего возраста, беременным. Они эффективно борются с НСV, бояться гепатита С не нужно.

Источник: https://progepatity.ru/gepatit-c/rnk-hcv-ne-obnaruzheno-chto-jeto-znachit

Анализ ПЦР гепатита С (РНК гепатита С)

анализ пцрАнализ РНК HCV (определение РНК вируса гепатита С), часто называемый анализ ПЦР гепатита С — это исследование крови, позволяющее выявить непосредственно генетический материал вируса гепатита (каждый вирус — это одна частица РНК). Этот тест чаще всего выполняется методом ПЦР, — отсюда и название ПЦР гепатита С. Существуют качественный и количественный анализы на РНК ВГС.

Качественный анализ указывает на наличие вируса в крови. Данный тест необходимо проводить всем пациентам, у кого обнаружены антитела к гепатиту С. Его результат может быть «обнаружено» или «не обнаружено». Референсные значения (значение, которое должно быть в норме) — «не обнаружено». Результат «обнаружено» может свидетельствовать о том, что вирус размножается и инфицирует все новые клетки печени. Качественный тест ПЦР имеет определенную чувствительность (10-500 МЕ/мл.). Это означает то, если вирус присутствует в крови в очень малой концентрации (ниже порога чувствительности метода), может быть получен результат «не обнаружено». Поэтому, при проведении качественного ПЦР у пациентов с низкой виремией (концентрацией вируса), например, проходящих противовирусную терапию, важно знать чувствительность диагностической системы. Для контроля вирусологического ответа при проведении противовирусной терапии желательно использовать диагностическую систему с чувствительностью не ниже 50 МЕ/мл. Таким критериям соответствуют, например, анализаторы COBAS AMPLICOR ВГС-TEST (аналитическая чувствительность 50 МЕ/мл или 100 копий/мл), РеалБест РНК ВГС (аналитическая чувствительность 15 МЕ/мл или 38 копий/мл) и другие.

Где безопасно купить новые препараты для лечения гепатита C? На наш взгляд, самый оптимальный и надёжный способ — это воспользоваться услугами проверенных годами поставщиков на нашем форуме, которые уже помогли избавиться от этого заболевания сотням пациентов.

Стоимость пцр

ПЦР анализ, стоимость которого зависит от применяемых реактивов, и может составлять от 300 руб. до 5000 руб., выполняется от одних суток до недели.

Кроме метода ПЦР для выявления РНК ВГС также используется метод транскрипционной амплификации (ТМА), обладающий лучшей чувствительностью (порядка 5-10 МЕ/мл.), однако этот метод в России пока не распространен.

Как часто нужно делать ПЦР гепатита C? Обычно его проводят сразу после обнаружения антител к гепатиту C и после 4-й, 12-й, 24-й недели противовирусной терапии, а также через 24 недели после завершения ПВТ, а затем — ежегодно, в случае УВО.

Рис. 1. Пример результатов качественного ПЦР гепатита С.

ПЦР гепатита С

Количественный анализ ПЦР (вирусная нагрузка) — это тест на концентрацию вируса (виремию) в  крови. Вирусная нагрузка — это количество единиц генетического материала (вирусной РНК), которая присутствует в определенном объеме крови (обычно это 1 мл, что соответствует 1 кубическому сантиметру). Это количество выражается в цифрах, единицы измерения МЕ/мл (международные единицы на миллилитр). Количество вируса может быть отображено по-разному. Например, 1,5 млн МЕ/мл, что соответствует 1.500.000 МЕ/мл или 1.5* 106 МЕ/мл. В некоторых лабораториях используются другие единицы измерения — копии/мл. Коэффициент пересчета из копий в международные единицы различный для разных тест-систем. Примерно значения можно пересчитать по формуле 1 МЕ/мл = 4 копии/мл, например, 5.5* 105 МЕ/мл = 2.2* 106 копий/мл.

Важно знать, что не существует прямой связи между концентрацией вируса в крови и тяжестью гепатита С.

На что же влияет вирусная нагрузка?

Во-первых, на инфекционность. Чем выше концентрация вируса, тем выше риск передать вирус, например, при половых контактах или вертикальным путем. Во-вторых, концентрация вируса влияет на эффективность лечения (если лечение будет проводиться на основе интерферона). Так, низкая вирусная нагрузка является благоприятным фактором при проведении терапии, а очень высокая – неблагоприятным. Также, количественный ПЦР имеет большое значение при проведении интерфероновой терапии для оценки ее успешности и планировании длительности курса. Так, при быстром ответе на лечение и низкой виремии перед терапией, сроки лечения могут быть сокращены. И, наоборот, при медленном снижении концентрации вируса, ПВТ может быть продлена.

Какая нагрузка считается низкой, а какая — высокой?

Высокой принято считать нагрузку свыше 800 *103 или 800.000 ME/мл, что примерно составляет 300*104 или 3.000.000 копий /мл. Нагрузка свыше 1*107 ME/мл считается очень высокой. Однако до сих пор среди специалистов нет общего мнения о значениях, разграничивающих высокую и низкую виремию. Так, в некоторых работах этой границей считается цифра 400.000 ME/мл.

Как часто нужно делать количественный тест?

Обычно его делают перед проведением терапии и после 12-й недели лечения для оценки ее эффективности в случае, если качественным тестом РНК еще определяется.

Результатом количественного теста может быть количественная оценка виремии в формате, описанном выше, а также результаты «ниже диапазона измерений» и «не обнаружено».

Порог чувствительности количественного ПЦР обычно выше, чем качественного. Так, для системы COBAS AMPLICOR он составляет 600 ME/мл. Результат «не обнаружено» может означать, что количественный тест и подтверждающий качественный тест не обнаружил вирусную РНК. Результат «ниже диапазона измерений» означает, что количественный тест не выявил РНК гепатита С, но вирус присутствует в очень малой концентрации (в случае, если при этом был проведен дополнительный подтверждающий качественный тест).

Рис.2 Пример результатов количественного теста.количественный ПЦР

Источник: https://www.hv-info.ru/gepatit-s/analizy/pcr.html

Разновидности и необходимость применения исследований методом ПЦР

Вирус гепатита С — это вирус, который содержит молекулу РНК. Он способен избегать иммунного ответа организма благодаря высоким способностям к мутации. Различают шесть основных генотипов вируса и множество субтипов. В нашем регионе в основном распространены 1, 2 и 3 генотипы.

У 75–80 % болезнь переходит в хроническую форму, что вызывает фиброз печени — состояние, при котором ткани печени заменяются соединительной тканью. Фиброз, в свою очередь, приводит к раку или циррозу. Основной путь передачи заболевания — через кровь. Если у человека имеются показания к проведению теста на гепатит С, ему проводят два основных теста. Определяют антитела к вирусу, и при их отсутствии считается, что гепатита у него нет. Если же в крови обнаруживается наличие антител к вирусу гепатита, проводится анализ методом ПЦР.

РНК таким методом определяется в крови уже через 10–12 дней после инфицирования и свидетельствует о том, что вирус активно размножается в организме. В этот период обнаружить вирус другим способом просто невозможно, так как специфических антител он еще не вырабатывает и поражения печени еще незаметны при биохимических анализах и биопсии.

пцр диагностика

Разновидности исследований методом ПЦР

Анализ методом полимеразной цепной реакции имеет определенные преимущества:

  1. При таком исследовании проводится определение самого вируса, а не продуктов его жизнедеятельности. При этом существует возможность определить вид возбудителя.
  2. Методика обладает высокой специфичностью благодаря тому, что исследуется только определенный участок ДНК, уменьшается вероятность получения ошибочных результатов.
  3. Имеет очень высокую чувствительность, определяется даже минимальное количество вируса в крови.

Существует два основных метода исследования крови на гепатит С при помощи ПЦР: качественный и количественный анализ ПЦР. Качественный метод используется для определения факта наличия вируса. Всем у кого в крови были обнаружены антитела к гепатиту, проводится такой анализ. Результат может быть только двух типов: «обнаружено» и «не обнаружено», последнее значение считается нормой.

Положительный результат теста означает, что в образце были найдены фрагменты РНК вируса, что, в свою очередь, говорит о том, что человек был инфицирован гепатитом. В случае негативного результата возможны два варианта: инфицирования не было или его концентрация настолько мала, что не обнаруживается данной методикой.

Количественный метод отличается по сути исследования, по его задачам и по показаниям. Не все больные гепатитом проходят такой анализ. У него, как и у любого другого, существуют определенные цели. Определение вирусной нагрузки или количественный анализ ПЦР на РНК вируса используется:

  • для определения РНК вируса в крови и постановки диагноза «вирусный гепатит»;
  • для прогнозирования хронизации гепатита и течения болезни;
  • для мониторинга противовирусного лечения и принятия решения о его продлении, сокращении или об изменении тактики лечения.

Исследование проводится при наличии таких показаний:

  • гепатит С обнаружен при качественном исследовании и в крови обнаружены антитела;
  • при микст-гепатитах;
  • если планируется проведение противовирусной терапии;
  • во время и после лечения от гепатита С;
  • при наличии хронического и острого гепатита С.

Тест проводится для оценки количества единиц вируса в заданном объеме образца крови 1 см³ или 1 мл. Результаты приводятся в цифрах. Показатели используются: МЕ/мл, что означает международная единица на миллилитр и копии на мл, количество копий РНК в 1 мл образца. Чем выше количественный показатель анализа, тем большая вероятность передачи вируса другому человеку.

Р-ДНК — метод разветвленной ДНК. Более простой и недорогой метод. Используется для большего количества образцов, имеет невысокую чувствительность, от 500 МЕ/мл. При такой чувствительности есть вероятность не определить вирус, даже если он присутствует в крови.

ТМА — метод транскрипционной амплификации. Такая методика обнаруживает в крови нуклеиновые кислоты. Имеет невысокую стоимость и при этом высокую чувствительность, от 5–10 МЕ/мл. Относительно новая методика, позволяющая ускорить и удешевить процесс тестирования.

Результаты количественного анализа определение РНК вируса, представленные лабораторией, расшифровываются следующим образом:

Числовое значение количества вируса, МЕ/мл Расшифровка результатов
Не обнаружено Норма для здоровых людей. Значение вируса ниже предела чувствительности метода или он отсутствует вовсе.
До 1.8*10^2 Концентрация ниже линейного диапазона.
До 8*10^5 Вирус в крови обнаружен. Вирусная нагрузка низкая.
Больше 8*10^5 Вирус обнаружен. Вирусная нагрузка высокая.
Больше 2,4*10^7 Вирус обнаружен. Виремия высокая, выше линейного диапазона.

Результаты количественного анализа могут подаваться как в единицах МЕ/мл, так и в копиях на мл. При этом коэффициент перевода обычно отличается для разных лабораторий и методик. Его значения колеблются в пределах от одного до пяти, принято считать, что в среднем 1 МЕ — это 4 копии на мл.

Метод Коэффициент пересчета, копий на мл в 1 МЕ
Amplicor HCV Monitor v.2.0 (руч.) 0.9
HCV Monitor v2.0 (полуавт.) 2.7
Versant HCV RNA 3.0 5.2
LCx HCV RNA 3.8
SuperQuant 3.4

Применимость исследования виремии на различных этапах

Анализ применяется для обнаружения активной инфекции в организме. По его результату можно судить о том, какова вероятность передачи вируса. Это важно, например, при беременности, когда речь идет о возможности заражения ребенка от матери больной гепатитом.

Анализ проводится только после обнаружения наличия в крови антител к вирусу. Он необходим, поскольку до 25 % людей, перенесших острую форму гепатита, выздоравливают сами по себе, и у них не обнаруживается вирус при лабораторных исследованиях. Результаты используются для оценки эффективности проведения лечения и до него.

ПЦР диагностика проводится до лечения, чтобы в последующем определить его эффективность. Вероятность благоприятного исхода лечения обратно пропорциональна этому параметру. Чем он выше — тем хуже прогноз.

Во время лечения анализ проводится на 1, 4, 12, 24 неделях. Лечение дает полный вирологический ответ при условии, что вирусная нагрузка таким анализом не определяется.

Если через 12 недель после начала терапии показатель не снижается на две логарифмические единицы,то вероятнее всего эта терапия не поможет в этом конкретном случае.

В анализах падение вирусной нагрузки на логарифмическую единицу выражается в уменьшении количества нулей результата на один. Например, с 1 000 000 МЕ она должна уменьшится до 100 000 МЕ.

После лечения определяется для обнаружения рецидивов. Так, отклонение этого параметра от нормы говорит о том, что количество вируса в организме растет и, таким образом, болезнь возвращается.

Некоторые показатели, могут оказывать влияние на результат. Прежде всего, это возможная ошибка лаборатории, нарушения норм проведения исследования, норм содержания и подготовки образцов, а также:

  • загрязнение образца биоматериала;
  • наличие в крови остаточных следов гепарина;
  • присутствие в крови ингибиторов — субстанций, которые представляют собой химические соединения или белки, которые оказывают влияние на компоненты ПЦР.

Отличаться результаты исследования могут также для разных лабораторий, что обусловливается применением разных реактивов и других причин. Такое явление абсолютно нормально. Поэтому для правильной оценки эффективности лечения стоит проводить анализ в одной и той же лаборатории.

Важные замечания по поводу методики исследования:

  • По уровню вирусной нагрузки нельзя судить о степени поражения печени или тяжести протекания самого гепатита. Для оценки этих показателей, необходимо проводить дополнительные исследования, такие как биохимический анализ крови, биопсия, эластометрия и другие.
  • При планировании и противовирусной терапии, кроме показателя виремии, важно определить генотип вируса.

Источник: https://apechen.ru/diagnostika/virus-gepatita-s-kolichestvennyj-analiz.html

Ссылка на основную публикацию